多項(xiàng)選擇題下列哪些因素對(duì)保證較高連接效率是有利的()

A.高純度DNA。
B.載體與目的基因摩爾數(shù)之比為1:1。
C.載體與目的基因摩爾數(shù)之比為1:3~5。
D.連接反應(yīng)體系中DNA濃度較高。
E.連接反應(yīng)體系中DNA濃度較低。


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1.多項(xiàng)選擇題下列與DNA重組連接相關(guān)的說(shuō)法正確的是()

A.不匹配的粘末端可通過(guò)部分填補(bǔ)后連接。
B.同聚尾法連接不僅連接效率高,也易回收插入的片段。
C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS終止液抑制限制酶活性,將有利于重組連接。
D.Mg2+-ATP是T4DNA連接酶反應(yīng)時(shí)的必須因素。
E.平末端連接時(shí),在反應(yīng)體系中加入適量凝聚劑可提高連接效率。

2.多項(xiàng)選擇題下列關(guān)于同聚物加尾法的說(shuō)法正確的是()

A.其核心是利用末端轉(zhuǎn)移酶的功能,將載體和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。
B.不易自身環(huán)化。
C.連接效率高
D.適用于CDNA克隆
E.可能會(huì)產(chǎn)生某種限制酶切位點(diǎn)。

3.多項(xiàng)選擇題構(gòu)建載體時(shí),使用雙酶切相對(duì)于單酶切的優(yōu)點(diǎn)在于()

A.避免載體自身環(huán)化
B.提高連接效率
C.控制外源基因的插入方向
D.便于轉(zhuǎn)化后的篩選
E.便于修改閱讀框

4.多項(xiàng)選擇題在DNA重組連接時(shí),常采用連接頭連接(linker ligation),其作用是()

A.引入某些限制酶切位點(diǎn)。
B.人工構(gòu)建載體。
C.增加調(diào)控元件。
D.調(diào)整閱讀框。
E.通過(guò)接頭引入與目的基因相同的限制酶位點(diǎn),并對(duì)目的基因相應(yīng)酶切點(diǎn)進(jìn)行甲基化修飾保護(hù),可保護(hù)目的基因不受限制酶破壞。

5.多項(xiàng)選擇題DNA片段重組連接可用下列哪些方法()

A.平末端連接
B.粘末端連接
C.加接頭連接
D.同聚尾連接
E.T載體連接